膜蛋白鉴定分析

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膜蛋白,例如受体和离子通道是细胞功能的关键调控器。膜蛋白占药物靶点的三分之二,这显示了它们在制药中的重要性。

G蛋白偶联受体(GPCRs)是数量最大、功能最多的膜受体,在制药方面也最重要,超过50%的人类药物靶点是G蛋白偶联受体,且是很多疾病的治疗靶点,包括癌症、心血管疾病、代谢疾病、神经疾病和炎症。

离子通道代表了另外一类重要的药物靶点膜蛋白,占目前市场上药物的10%。尽管它们非常重要,要制备足量纯净、正确折叠态的细胞膜受体蛋白用于药物研究非常困难。

我们提供如下膜蛋白分析服务

从细胞质、外周胞质、细胞培养上清液中纯化膜蛋白。

实际操作中,根据表达宿主或表达载体的不同,需要从细胞质、(细菌)外周胞质、细胞培养上清液中纯化蛋白,我们为每种用途提供了经优化的蛋白提纯方案

1. 为溶解和纯化筛选合适的缓冲液和去垢剂
对于可溶性膜蛋白,最佳的稳定缓冲条件可以用差示扫描荧光法(DSF) 来测定。通过建立一套动态分析方法来找出蛋白活性与稳定性之间关系。从细菌或真核细胞细胞膜中提取膜蛋白或膜粘附蛋白时,需要使用去垢剂,在蛋白的提取和纯化过程中,去垢剂对蛋白的稳定性很有帮助。如果蛋白被达为包涵体,重新溶解和复性的瞬间,可以筛选出最优变性和缓冲条件。

2. 用His、Rho1D4、GST、或strep tag进行亲和纯化
我们会使用高质量的亲和纯化基质纯化融合了His、GST或Strep标记的蛋白质。对于膜蛋白,我们建议使用Rho1D4系统进行纯化。如果有其他标记的纯化需求,可以向我们咨询。我们在小规模水平上对纯化条件进行过优化,但优化条件可以根据具体的目标蛋白放大到mg水平。如果需要,服务内容可以包含缓冲试剂、变性缓冲液的优化,从而保证蛋白质的稳定性及活性。我们还提供包括SDS-PAGE和Western Blot在内的每一步操作的全套文件。

3. 进一步纯化以得到均质、可结晶的蛋白组分
为了达到高纯度、均质、适合于如蛋白结晶试验或功能结合试验的蛋白组分,可以进行第二步或第三步纯化。可使用如阴离子或阳离子交换色谱或凝胶层析。我们在小规模水平上对纯化条件进行过优化,但优化水平可以根据具体的目标蛋白放大到mg水平。如果需要,服务内容可以包含缓冲试剂、变性缓冲液的优化,从而保证蛋白质的稳定性及活性。我们还提供包括SDS-PAGE和Western Blot在内的每一步操作的全套文件。