交联蛋白相互作用分析

crosslinking-protein-intera

体内大多数的蛋白相互作用是瞬时的。捕捉或冻结这些瞬间的相互作用,可以研究参与其中的蛋白以及参与方式。蛋白相互作用是蛋白质组学研究的重要部分。交联助剂或交联剂能够将相互作用的蛋白共价连接,从而冻结那些瞬时、微弱的相互作用,有利于后续蛋白复合体的分离和表征,为蛋白-蛋白复合体的捕获提供了手段。

交联可以在体内或体外进行。体内交联的优点是,蛋白相互作用可以在原生环境下进行,以防止产生假阳性的相互作用以及样品制备中复合物稳定性的损失。疏水、脂溶性的交联剂用于捕捉细胞膜内或跨细胞膜的靶向蛋白,而亲水、水溶性的交联剂用于交联细胞表面的蛋白。虽然体内交联可以得到与生理学相关且稳定的复合体,并用于后续分析,但无法严格控制反应条件,交联剂可能与含有官能团的多种蛋白反应,从而带来非特异性。与体内交联相反,体外交联反应条件受到严格控制,如pH、温度和反应物浓度,因此体外交联能提供更好的靶向交联,蛋白相互作用的检测分辨率更高。同时,体外交联允许修饰交联蛋白,并且疏水和亲水性交联助剂都已商业化。体外交联的问题是蛋白复合体并非在生理学条件下组装。

各种用途的交联助剂都有市售,选择体内还是体外交联的关键取决于靶向蛋白,尤其依赖于蛋白复合体的细胞定位以及蛋白复合物相互作用的稳定性。我们的科学家乐于与您探讨实验细节,为您提供快速、可靠的蛋白相互作用分析服务。