iTRAQ蛋白质组学分析

我们提供iTRAQ/TMT蛋白质定量服务,该技术适合于非靶向的寻找生物标志物。
基于质谱的iTRAQ/TMT技术可以快速、轻松实现蛋白的相对定量,用于复杂体系中生物标志物的筛选。iTRAQ/TMT是比较正常、疾病以及药物治疗后样本间的表达差异,研究时间进程中的蛋白变化,比较生物重复间的不同以及提供蛋白相对定量的理想工具。

itraq

通过结合稳定同位素进行蛋白质定量已经成为现代蛋白质组学研究的核心技术。蛋白质组学使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ /TMT)来研究蛋白质组的量变。

基于iTRAQ/TMT的定量使得不同背景(如正常、疾病、药物治疗状态)下的肽段和蛋白的比较变得简单。

比如iTRAQ技术利用同位素试剂标记肽段和蛋白的伯胺。iTRAQ试剂通常由N-甲基哌嗪报告基团、平衡基团以及N-羟基丁二酰亚胺肽反应基团(酯类结构,与肽的伯胺有反应性)组成。平衡基团的功能是使iTRAQ试剂标记的每个样品的同一肽段具有相同的质荷比,通过分析质谱中的报告离子进行肽段的定量。iTRAQ目前主要有两种试剂:4标记和8标记,TMT技术有6标记和10标记,可用于标记不同样品/处理的所有肽段。样品被混合后经过纳米液相色谱分级后由串级质谱(MS/MS)分析。

iTRAQ/TMT分析流程包括以下几步:
1) 待定量样品经不同条件处理完毕后,经细胞裂解抽提蛋白;
2) 用蛋白定量试剂盒预估每个样品中的蛋白浓度;
3) 蛋白经蛋白酶,如胰蛋白酶酶切得到肽段;
4) 各组肽段用不同的iTRAQ/TMT试剂标记并混合;
5) 混合后的样品用LC-MS/MS做定性定量分析。
6) 随后用碎片数据搜库鉴定被标记的肽段,并进一步匹配到蛋白质。标记试剂的碎裂离子生成低分子量的报告离子,可以用于相对定量相应的肽段或蛋白。