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LiP-MS和TPP demo报告

LiP-MS和TPP目前我们有多种方案设计:单浓度LiP-MS、单温度TPP、多浓度LiP-MS和多温度TPP。考虑到成本与难度,我们更推荐单点(组合)方案 方案详情见链接: 药物识别蛋白组:LiP-MS和TPP技术方

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LiP-MS和TPP目前我们有多种方案设计:单浓度LiP-MS、单温度TPP、多浓度LiP-MS和多温度TPP。考虑到成本与难度,我们更推荐单点(组合)方案 方案详情见链接: 药物识别蛋白组:LiP-MS和TPP技术方

在做分析时,不同方案的分析策略和内容有些不同

LiP-MS单浓度分析:先扣背景,再 肽段水平 筛选差异,

TPP多温度分析:不扣背景,蛋白水平筛选差异,

多浓:多温度:可绘制拟合曲线

接下来展示各方法的分析结果:

在细:细胞裂解液与药物孵育后,可能会导致蛋白表达发生变化或者蛋白溶解度发生变化,也就是说,有些蛋白即使没有与药物结合,也有可能在孵育组和未孵育组中表现为差异,或者有些靶蛋白本来应该 在孵育组和非孵育组中 差异,实: 检测不到差异

因此LiP-MS实验方案会设计背景扣除组,LiP实验组是做Proteinase K+Trypsin双酶切,背景扣除是仅做Trypsin 酶切的全蛋白组, 数据分析 时背景扣除组可以起到数据归一化矫正的作用 这样筛选药物孵育前后的差异肽段,即潜在药物结合区域,才更准确

进而筛选孵育组和未孵育组的差异肽段,这: 差异肽段可能就是药物结合肽段 计算每个肽段在各比较组样本中: 平均 定量值,比较两组样本均值的比值即为差异倍数(Fold Change),同时通过T检验(T-test)计算p值(P.Value)来判断差异的显著 。此外还会计算Lip得分,值越大表示蛋白与小分子结合的可能性越大。差异肽段及统计图表如下所示:

火山图展示孵育组vs未孵育组的上/下调表达差异肽段,基于倍数变化和p-value两个统计值,聚类热图展示差异肽段在不同组样本中的表达情况

接下来进行功能分析, 进一步了解药物结合后对哪些功 和通路有显著影响,从而寻找核心药靶 该部分内: 是基: 差异 肽段 所属蛋 进行GO功能、KEGG通路和蛋白互作网络分析,蛋白本身不考虑差异

GO功能分析:基于GO数据库,对差异肽段所属蛋白进行生物学过程、细胞组分和分子功能的注释和富集分析

KEGG通路分析:基于KEGG通路数据库,对差异肽段所属蛋白进行新陈代谢、细胞过程,人类疾病等通路的注释和富集分析

STRING蛋白互作网络分析:展示蛋白已知或预测的相互作用信息,根据连通性等参数结果,寻找关键互作节点

基于上述差异肽段分析结果,再结合目标研究方向、疾病和细胞器定位等参考信息,可以锁定到几个潜在靶标,然后进行分子对接、细胞热位移实验等验证,为药物与靶点的结合提供直接证据

在客户确定好药靶后,我们可以提供肽段Barcode图、蛋白结构图等可视化结果,可以帮助观察由于药物结合或构象变化导致表达变化的肽段区域

该部分内容在客户确定好目标药靶之后提供。备注:蛋白结构图需要蛋白和药物在数据库中有三维结构才能做

基本同上述LiP-MS分析内容,只 1 )& TPP不需要做背景扣除:) TPP分析的是蛋白水平表达,不做肽段可视化

LiP-MS和TPP demo报告资料图 1
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LiP-MS和TPP demo报告资料图 2
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LiP-MS和TPP demo报告资料图 3
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LiP-MS和TPP demo报告资料图 4
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