TMT (Tandem Mass Tag)是一种体外同位素标记肽段的技术，结合质谱的数据依赖性采集（Data-dependent acquisition，DDA)可以对生物样本进行全蛋白质组检测。TMT-DDA技 广泛应用于蛋白质组研究中，能够同时分析和定量多个样品中的蛋白质表达水平： 通过比较不同条件下的样品…
查看原始文章来源 ↗TMT (Tandem Mass Tag)是一种体外同位素标记肽段的技术，结合质谱的数据依赖性采集（Data-dependent acquisition，DDA)可以对生物样本进行全蛋白质组检测。TMT-DDA技 广泛应用于蛋白质组研究中，能够同时分析和定量多个样品中的蛋白质表达水平： 通过比较不同条件下的样品，TMT-DDA技术可以帮助发现与疾病或生物过程相关的蛋白质标志物 蛋白质功能和蛋白-蛋白相互作用的变化
技术原理： 在样品处理过程中，使用TMT标签对样品中的蛋白质进行标记。每个样品用不同的TMT标签标记，标记后将样品混合，一同进行质谱分析，这些标签在质谱分析时会产生特定的报告离子。通过检测这些报告离子的强度，可以进行样品间的相对定量分析和比较 在质谱DDA（Data-Dependent Acquisition）模式下，质谱仪首先进行一级质： （MS1 全扫描，检测样品中的所有离子。接着，系统根据全扫描数据选择丰度Top N的离子进行二级质谱分析（MS2），以获得这些离子的碎片信息。这个过程会重复进行，以获得样品中更丰富的离子定性定量数据
适用对象：常见组织、细胞、体液等蛋白含量较高的样本，一个标记组可实现最：8个样本中蛋白质的相对含量，超：8例样本需要搭桥
常见样本类型及送样量如下：
动物组织TMT蛋白组：20mg-60mg
细胞TMT蛋白组：1×10^6个细：管或20μl细胞沉淀/管（有备份更好）
血清、血浆TMT蛋白组：100μl
植物TMT蛋白组：叶片--300mg-1g；果实、种：-500mg-2g
TMT磷酸化蛋白组：能够提：mg蛋白的样本量
TMT的优势在于可以通过色谱分级提供更深的蛋白组覆盖，并且一个标记组内同时检测可以降低缺失值，降低系统误差，标记组间可以设置内参降低批次效应，因此，常见的组织、细胞等绝大多数蛋白含量较多的样本， 18例以内的样本数量 可以选择TMT方法
我们搭建了一整套的完整上下游流程，包括试剂盒化、自动化、高通量样品前处理，自动化微量分级和高性能质谱采集，以及专 数据分析 平台和质控平台，助力TMT标记定量蛋白质组研究
针对TMT蛋白组的样本制备流程，采用微量标记试剂盒，试剂盒化操作从蛋白提取、变性、酶解、TMT标记到纯化的一系列流程步骤，并且蛋白质前处理相关流程整合到了自动化工作 中， 仅需3-4小时 完成从细：蛋白沉淀/体液到纯化标记多肽，快速高效且高度重复： 适用10-100μg的蛋白前处理和标
EasyPept-Label微量标记前处理制备试剂盒
PreOmics NHS 标记定量样品蛋白处理试剂
关键技术：色谱分级（Fractionation
将多肽样品加入C18色谱柱中，通过不同配比的水和乙腈组成亲：>疏水梯度变化的洗脱溶液，将不同亲疏水性的多肽收集成不同的组份，再联用LC-MS检测，可以降低每个LC-MS的样品复杂度，进而提升总的蛋白检测覆盖度。该方法尤其适用于TMT混样标记的多肽样品 需要注意的是如果分级数量较少（低于10个），结果可能不会优于非标定量
高性能质谱推荐另见链接 精准质谱仪器推荐
为确保实验过程的可靠性，同时为客户提供样本重复性建议，我们搭建了一个质控分析云平台： 该平台可以自动监测TMT数据 全方位考察色谱系统、质谱系统，定性结果和定量结果等多个方面。针对TMT项目： 们专 设计了三个水平的QC模块，包括对分级上机数据进行色谱分离效果、质量精度、鉴定数量和定量分布的考察；评估各样本的露切率、标记效率、离群样本和定量分布；对多个标记组之间进行鉴定数量、数据完整性、PCA和表达热图的比较，这些内容很好地帮助我们评估项目数据
