微量磷酸化+全蛋白组技术方案
蛋白质是基因功能的执行者，磷酸化作为关键翻译后修饰，是细胞内的功能"开关"——即使蛋白质表达量未变，磷酸化差异仍可能反映关键的功能变化。传统磷酸化研究需要大量样本，我们开发的微量技术方案突破这一限制，让珍贵样本（穿刺组织、切片、FFPE等）也能同时进行磷酸化蛋白组和全蛋白组双重分析。
为什么要同时研究蛋白-磷酸化？
整合研究，深入理解细胞功能调控机制
基因-表型功能桥梁
蛋白质是基因的表达产物，也是基因功能的执行者。相比基因或 mRNA 水平，评估蛋白质的活性和调控状态能更直观地揭示细胞功能的变化。
磷酸化：细胞功能开关
磷酸化像是细胞内的“开关”，能快速调节蛋白质的功能，这对理解生理病理机制至关重要。
蛋白-磷酸化双重视角，揭示生物学本质
蛋白表达量
整体功能状态
整合分析
磷酸化调控
瞬时功能状态
双重价值：
全方位解决方案
三种技术方案适应不同样本需求
常规方案
针对300μg蛋白样本的前处理方案，适合样本量充足的研究项目。
样本处理：200μg肽段进行磷酸化富集
流程时间：从蛋白变性到富集仅需4小时
质谱检测：高通量高灵敏度质谱平台
检测深度：高深度磷酸化蛋白组检测
送样建议
磷酸化蛋白组：每例需要300μg蛋白的原始样本
常规全蛋白组：每例需要20μg蛋白的原始样本
微量高灵敏方案
对50-300μg蛋白珍贵样本同时进行磷酸化和全蛋白组检测的创新方案。
样本分配：80%纯化肽用于磷酸化检测 + 20%用于全蛋白组分析
高效处理：优化后仅需4小时操作时间
检测精度：优于商业化试剂盒
样本节省：微量样本高效利用
送样建议
仅需要50-300μg蛋白即可同时检测两套组学
FFPE样本全蛋白+磷酸化方案
突破福尔马林固定样本的技术限制，一片FFPE切片即可完成两种组学分析。
样本处理：优化前处理与富集，提高（磷酸）肽得率
肽段分配：10%纯化肽用于全蛋白质组 + 90%用于磷酸肽富集
技术突破：解决蛋白交联与修饰丢失问题
样本来源：适用于临床样本库中的大量FFPE样本
送样建议
1张FFPE切片（＞5mm×5mm）即可分析，建议多送几份备用
项目实测数据
多种方案在不同样本中的优异表现
常规方案
磷酸化位点
60例临床组织队列 | timsTOF Pro2 | DIA 1h
7600+ 磷酸化蛋白
12000+ 全蛋白
微量高灵敏方案
磷酸化位点
40例小鼠脑切片 | 起始量≤150μg | DIA 60min
7000+ 全蛋白平均
最小10μg肽检测4500+个P-sites
FFPE方案
磷酸化位点
104例临床FFPE样本 | timsTOF HT | DIA 25min
单例样本：5000-12000个磷酸化位点
深度分析内容
多维数据揭示生物学意义
数据统计与质量控制
■ 定量蛋白和磷酸化位点数量统计
■ 样本相关性分析和重复性评估
■ 质谱数据质量评估
■ 修饰位点置信度、定位及定量
差异分析
■ 蛋白与磷酸化位点差异筛选
■ 差异热图与聚类分析
■ 差异蛋白与磷酸化位点韦恩图分析
■ 差异蛋白与磷酸化位点火山图
功能富集与网络分析
■ GO、KEGG通路富集分析
■ Kinase-Substrate富集分析
■ 蛋白-蛋白互作网络（PPI）
■ 通路注释可视化图
联合分析
■ 表达趋势九宫格分析
■ 组学相关性分析
■ 两组学功能富集分析
■ 功能网络分析
成功应用案例
磷酸化+全蛋白组研究揭示组织空间动态变化与肿瘤标志物
小鼠脑切片空间动态磷酸化研究
研究设计
10组鼠脑冠状切片
每组脑区有独特分布特征
40个样本（每组4张连续切片）
微量高灵敏磷酸化+全蛋白检测
主要发现
平均每组定量到7000+蛋白
共定量21000+磷酸化位点
从10μg肽中检测4500+磷酸化位点
生物学意义
不同脑区磷酸化变化比蛋白组更明显
区域特征性磷酸化与神经变性相关
揭示了脑区细胞调控的特异性
人脑肿瘤大队列磷酸化+全蛋白组研究
研究设计
胶质瘤和转移瘤特异性研究
全蛋白组：148例癌及癌旁
微量磷酸组：120例癌和癌旁
蛋白前处理与磷酸肽富集全自动
主要发现
定量12000+种全蛋白
定量23000+条磷酸肽
磷酸组更好聚类不同组织类型
诊断价值
激酶-底物网络分析
不同肿瘤中有特异性激酶被激活
转移瘤中RAF1激活，其靶向药物Sorafenib被证明可预防肾癌脑转移